| 更新時(shí)間： | 2023-10-27 |
| 訪(fǎng)問(wèn)量： | 3780 |
| 廠(chǎng)商性質(zhì)： | 生產(chǎn)廠(chǎng)家 |
提供商：上海研謹生物/杭州研謹生物服務(wù)名稱(chēng)：免疫共沉淀（CHIRP）實(shí)驗規格：實(shí)驗服務(wù)價(jià)格：2000元周期：1-3個(gè)月
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)的優(yōu)點(diǎn)。
免疫共沉淀（CHIRP）實(shí)驗意義
IncRNA可與蛋白質(zhì)、DNA和RNA相互作用，實(shí)現多樣化功能，CHIRP可以探討IncRNA與其互作的DNA.蛋白質(zhì)的功能與作用機制，是相關(guān)科學(xué)研究工作的有力工具。IncRNA的研究在表觀(guān)遺傳調控等生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用，CHIRP是研究
IncRNA的重要技術(shù)手段，可在全基因組范圍內鑒定RNA與染色質(zhì)的互作，并對其進(jìn)行定性、定量及定位的分析。
免疫共沉淀（CHIRP）實(shí)驗原理
CHIRP (Chromatin Isolation by RNA Purification)是通過(guò)結合生物素的核酸探針，將目標RNA拉下來(lái),與之共同作用的DNA染色體片段(DNA與蛋白質(zhì)復合體)就會(huì )被吸附下來(lái)，后可以通過(guò)qRT-PCR. WB.測序分析和質(zhì)譜分析等檢測RNA. DNA和蛋白質(zhì)。
CHIRP的實(shí)驗流程
①探針設計:設計反義穿核苷酸探針:
②細胞培養;
③破碎細胞:
④生物素標記的DNA探針與RNA雜交;
⑤CHIRP;
⑥RNA、DNA及核酸結合蛋白提取; .
⑦分析檢測。,
結果展示
實(shí)驗完成周期及交付標準
1.實(shí)驗周期: 1-3個(gè)月
2.交付標準: CHIRP鑒定結果報告、分析報告、實(shí)驗報告(試劑、 耗材、實(shí)驗步驟)、原始數據等
實(shí)驗需與客戶(hù)確認的信息
1.目的基因與蛋白信息。
2.樣本類(lèi)型與種屬
3.是否需要生信分析
注意的問(wèn)題：
（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過(guò)經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。
（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。
（3）使用對照抗體：
單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類(lèi)單抗
兔多克隆抗體：正常兔IgG
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